นาโนซิลเวอร์คอปเปอร์ (Ag/Cu bimetal) ช่วยเพิ่มฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย
นาโนซิลเวอร์คอปเปอร์ ยมโดยการลดทางเคมีของเกลือไนเตรตตามลำดับด้วยกรดแอสคอร์บิกในสภาพที่มีไคโตซานโดยใช้ไมโครเวฟ ขนาดของอนุภาคเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของไนเตรตที่เพิ่มขึ้นและความเข้มข้นของไคโตซานที่ลดลง ศักยภาพซีตาของพื้นผิวเป็นบวกสำหรับอนุภาคนาโนทั้งหมดที่ผลิต และการเปลี่ยนแปลงมีช่วงตั้งแต่ 27.8 ถึง 33.8 mV ทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียของส่วนผสมของ Ag, Cu, Ag และ Cu และอนุภาคนาโนของทองแดงและเงิน (โลหะคู่ Ag/Cu) โดยใช้เชื้อ Bacillus subtilis และ Escherichia coli ในทั้งสองสายพันธุ์ B. subtilis ดูเหมือนจะอ่อนไหวมากขึ้นภายใต้เงื่อนไขที่ทดสอบทั้งหมด
อนุภาคนาโนเงินมีการทำงานมากกว่าอนุภาคนาโนทองแดง และส่วนผสมของอนุภาคนาโนที่มีขนาดอนุภาคเฉลี่ยเท่ากัน อย่างไรก็ตาม เมื่อเปรียบเทียบในระดับความเข้มข้นที่เท่ากัน อนุภาคนาโน Cu จะมีฤทธิ์ทำลายแบคทีเรียได้มากกว่าเนื่องจากมีพื้นที่ผิวที่มากกว่า พบว่าฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียสูงสุดได้จากอนุภาคนาโนไบเมทัลลิก Ag/Cu ที่มีความเข้มข้นยับยั้งขั้นต่ำ (MICs) ที่ 0.054 และ 0.076 มก./ล. ต่อ B. subtilis และ E. coli ตามลำดับ
ลูกค้าที่ต้องการทองแดง นาโนซิลเวอร์ ดิบ (ซิลเวอร์นาโน 15000 ppm, 300 ppm Cu) กรุณาติดต่อสายด่วน 098.435.9664
1. แนะนำ
ความสนใจในอนุภาคนาโนโลหะในฐานะสารต่อต้านแบคทีเรียนั้นมีมาเป็นเวลากว่าทศวรรษแล้ว (Dai & Bruening, 2002) จำนวนอนุภาคจำนวนมากที่สามารถผลิตได้และอัตราส่วนพื้นที่ผิวต่อปริมาตรที่สูงทำให้อนุภาคนาโนมีประสิทธิภาพในปริมาณที่น้อยมาก (Sundaresan, Sivakumar, Vigneswaran และ Ramachandran, 2012)
อนุภาคนาโนของเกษตรถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการประยุกต์ใช้ทางชีวการแพทย์ (Marambio-Jones & Hoek, 2010) Cu ค่อนข้างไม่เป็นพิษต่อสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม (Flemming & Trevors, 1989) แต่เป็นพิษต่อจุลินทรีย์หลายชนิด ซึ่งทำให้มีความหวังใหม่สำหรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ (Hsiao, Chen, Shieh, & Yeh, 2006)
มีการพัฒนาวิธีการต่างๆ หลายวิธีในการผลิตอนุภาคนาโน Ag และ Cu โดยใช้แนวทางทั้งทางกายภาพและทางเคมี วิธีที่นิยมใช้ในการเตรียมอนุภาคนาโน Ag คือการรีดิวซ์สารละลายเกลือเงินในน้ำหรือตัวทำละลายอินทรีย์ทางเคมีเพื่อผลิตสารแขวนลอยแบบคอลลอยด์ วิธีการที่พบมากที่สุดในการสังเคราะห์อนุภาคนาโน Cu คือการสร้างไมโครอิมัลชัน (Solanki, Sengupta และ Murthy, 2010)
อย่างไรก็ตาม เทคนิคไมโครอิมัลชันต้องใช้สารลดแรงตึงผิวและตัวทำละลายอินทรีย์จำนวนมาก ซึ่งทำให้ต้นทุนการผลิตเพิ่มขึ้น (El-Nour, Eftaiha, Al-Warthan และ Ammar, 2010) วิธีทางกายภาพที่ใช้เทคนิคการระเหิดด้วยเลเซอร์ การฉายรังสี หรือแอโรโซล แม้จะมีประสิทธิผล แต่ต้องใช้อุปกรณ์ราคาแพงและใช้พลังงานจำนวนมาก (Thakkar, Mhatre และ Parikh, 2010) วิธีการเหล่านี้มักใช้สารที่เป็นพิษและก่อมลพิษต่อสิ่งแวดล้อม (Lim & Hudson, 2004)
วิธีการลดการใช้สารเคมีเป็นทางเลือกที่ดีที่สุดในการลดต้นทุนและเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม อนุภาคนาโนของเกษตรได้รับการสังเคราะห์โดยใช้น้ำเป็นตัวทำละลายและแป้งเป็นสารปิดฝา และได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีข้อได้เปรียบเหนือวิธีการทั่วไปที่เกี่ยวข้องกับสารเคมีซึ่งเกี่ยวข้องกับพิษต่อสิ่งแวดล้อม (Sharma, Yngard และ Lin, 2009)
นอกจากนี้ ยังได้มีการพัฒนากระบวนการสังเคราะห์อนุภาคนาโนของ Ag โดยใช้ไคโตซานเป็นตัวรีดิวซ์และตัวปิดฝา (Sanpui, Murugadoss, Prasad, Ghosh และ Chattopadhyay, 2008) นอกจากนี้ อนุภาคนาโน Cu ได้รับการประดิษฐ์โดยใช้แอลจิเนตเป็นสารคงตัว (Díaz-Visurraga et al., 2012)
เมื่อไม่นานมานี้ มีการผลิตอนุภาคนาโนที่เกี่ยวข้องกับโลหะผสมสองชนิด Valodkar, Modi, Pal และ Thakore (2011) สังเคราะห์อนุภาคนาโนเงินไบเมทัลลิก Ag/Cu โดยใช้แป้งและ Said-Galiev และคณะ (2011) สังเคราะห์อนุภาคนาโนของ Ag และ Cu โดยใช้ไคโตซาน
พวกเขาได้รับการบำบัดด้วยคาร์บอนไดออกไซด์ยิ่งยวดตามด้วยการลดคอมเพล็กซ์โลหะออร์กาโนเมทัลลิกของ Ag และ Cu ด้วยไฮโดรเจนเพื่อสร้างอนุภาคนาโนโลหะ-ไคโตซาน นอกจากนี้ อนุภาคนาโนไบเมทัลลิกเงิน-ทองแดง Ag/Cu ยังเตรียมจากสารละลายซิลเวอร์ไนเตรตและคอปเปอร์อะซิเตตโดยมีไฮดราซีนไฮเดรตเป็นตัวรีดิวซ์ (Taner, Sayar, Yulug และ Suzer, 2011)
งานวิจัยนี้เป็นความพยายามในการพัฒนาการสังเคราะห์อนุภาคนาโน Ag และ Cu แบบเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมต่อไป ส่วนผสมของอนุภาคนาโน Ag และ Cu (เรียกอีกอย่างว่า “Ag + Cu”) และอนุภาคนาโนโลหะผสมของ Ag และ Cu (อนุภาคนาโนทองแดงเงินเรียกอีกอย่างว่า “Ag/Cu”) โดยมีไคโตซานเป็นสารคงตัวและใช้ความร้อนจากไมโครเวฟ
สิ่งที่น่าดึงดูดใจของการใช้ไคโตซานสำหรับฟังก์ชั่นนี้มากกว่าแป้งก็คือมันมีคุณสมบัติในการต่อต้านแบคทีเรีย (No, Park, Lee, & Meyers, 2002) และสามารถละลายได้ง่ายโดยใช้กรดอินทรีย์ (Muzzarelli et al., 1984; Muzzarelli, 1985) ไคโตซานสามารถสร้างพันธะเคมีต่างๆ กับส่วนประกอบโลหะได้ จึงช่วยเพิ่มเสถียรภาพของอนุภาคนาโน (Muzzarelli, 2011)
สารนี้มีพิษต่ำ จึงปลอดภัยต่อการใช้งานกับมนุษย์ (Muzzarelli, 2010) แม้ว่าจะยอมรับว่าอนุภาคนาโนโลหะที่ผลิตขึ้นอาจมีพิษต่อสิ่งแวดล้อมบ้าง (Li et al., 2010)
ในการศึกษาครั้งนี้ อนุภาคนาโนได้รับการสังเคราะห์ที่ความเข้มข้นของไคโตซานที่แตกต่างกัน อนุภาคนาโนที่สังเคราะห์ได้รับการกำหนดลักษณะโดยใช้การสเปกโตรโฟโตเมตรีและการใช้เครื่องซีตาไซเซอร์ คุณสมบัติต้านเชื้อแบคทีเรียได้รับการทดสอบโดยใช้เชื้อ Bacillus subtilis และ Escherichia coli.
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมี
คอปเปอร์(II) ไนเตรต (Cu(NO3)2.XH2O) (Sigma Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, เยอรมนี), ซิลเวอร์ไนเตรต (AgNO3) (BDH Ltd, Poole, สหราชอาณาจักร), กรดแอสคอร์บิก L (Sigma Aldrich, Poole, สหราชอาณาจักร), กรดอะซิติก (Fisher Scientific, Loughborough, สหราชอาณาจักร) และไคโตซาน (Sigma Aldrich, Poole, สหราชอาณาจักร) ถูกนำมาใช้เพื่อสังเคราะห์อนุภาคนาโน
น้ำหนักโมเลกุลของไคโตซานอยู่ในช่วง 50,000 – 190,000 Da และลดลง 75-85% สารเคมีทั้งหมดถูกนำมาใช้โดยไม่ต้องทำการบริสุทธิ์เพิ่มเติม
2.2 เตรียมสารละลายเคมี
สารละลายทั้งหมดต่อไปนี้เตรียมโดยใช้น้ำกลั่น: ซิลเวอร์ไนเตรต (10, 30 และ 50 mM), คอปเปอร์ไนเตรต (10, 30 และ 50 mM), กรดแอสคอร์บิก (10% w/v) สารละลายไคโตซาน (1, 2 และ 3% w/v) ถูกเตรียมโดยการละลายไคโตซานในสารละลายกรดอะซิติก 1% (v/v) จากนั้นทิ้งไว้ 3 วันเพื่อให้ไคโตซานละลายหมด (Wei, Sun, Qian, Ye, & Ma, 2009)
2.3 การเตรียมอนุภาคนาโน
2.3.1 อนุภาคนาโนของ Ag และ Cu
ในการเตรียมสารละลายอนุภาคนาโน Ag หรือ Cu จะต้องผสมสารละลายซิลเวอร์ไนเตรตหรือคอปเปอร์ไนเตรต (10, 30 หรือ 50 มิลลิโมลาร์) 40 มิลลิลิตรกับสารละลายไคโตซาน (1, 2 หรือ 3% w/v) 40 มิลลิลิตร และสารละลายกรดแอสคอร์บิก 10% (w/v) 4 มิลลิลิตร ปฏิกิริยาการลดเกิดขึ้นโดยการให้ความร้อนในเตาไมโครเวฟ (EM-SI067 สหราชอาณาจักร, Sanyo, จีน) ด้วยกำลังไฟสูงสุด 800 วัตต์เป็นเวลา 4 นาที (Valodkar, Modi, Pal, & Thakore, 2011)
2.3.2 อนุภาคนาโน Bimetallic Ag/Cu
ในการเตรียมอนุภาคนาโนไบเมทัลลิกซึ่งต่อไปนี้เรียกว่าอนุภาคนาโน “Ag/Cu” จะต้องผสมสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต 20 มล. และสารละลายคอปเปอร์ไนเตรต 20 มล. กับไคโตซาน 3% (w/v) 40 มล. และไคโตซาน 10% (w/v) 4 มล. (w/v) สารละลายกรดแอสคอร์บิก จากนั้นนำปฏิกิริยาไปทำในเตาไมโครเวฟโดยใช้กำลังไฟสูงสุด 800 วัตต์เป็นเวลา 4 นาที (Valodkar et al., 2011)
2.3.3 ส่วนผสมของอนุภาคนาโนของ Ag และ Cu
ในการเตรียมส่วนผสมง่ายๆ ของอนุภาคนาโน Ag และ Cu ซึ่งต่อมาเรียกว่าอนุภาคนาโน “Ag + Cu” อนุภาคนาโน Ag 40 มล. และอนุภาคนาโน Cu 40 มล. จะถูกสังเคราะห์แยกกันในไคโตซาน 3% (w/v) ตามที่อธิบายไว้ในส่วน 2.3.1 จากนั้นจึงผสมเข้าด้วยกัน (Valodkar et al., 2011)
2.4 สมบัติของอนุภาคนาโน
2.4.1 การวัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริก
สเปกตรัมการดูดกลืน UV-vis ของสารละลายอนุภาคนาโน Ag, Cu, Ag/Cu และ Ag + Cu ดำเนินการในช่วงความยาวคลื่น 200 ถึง 800 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องวัดการดูดกลืน UV-vis รุ่น UV mini-1240 (Shimadzu Corporation, เกียวโต ประเทศญี่ปุ่น)
2.4.2 การวิเคราะห์ขนาดอนุภาคและศักย์ซีตา
ขนาดอนุภาคของสารละลายนาโน Ag, Cu, Ag/Cu และ Ag + Cu ถูกวัดโดยใช้เครื่อง Zetasizer (รุ่น ZEM5002, Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK) โดยใช้คิวเวตต์ UV Grade หลังจากการบำบัดในอ่างน้ำอัลตราโซนิก (รุ่น FB11012, Fisherbrand, Loughborough, UK) เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อทำลายมวลรวมที่มีอยู่ (Ribeiro, Hussain, & Florence, 2005) ศักยภาพซีตาของอนุภาคนาโนแต่ละประเภทวัดโดยใช้รุ่น Zetasizer 3000HS (Malvern Instrument Ltd, Malvern, UK) การวัดทั้งหมดดำเนินการซ้ำสามครั้ง
2.5 วิธีการทางจุลชีววิทยา
2.5.1 แบคทีเรีย
เชื้อแบคทีเรียแกรมบวก Bacillus subtilis ATCC 6633 ได้รับจาก National Collection of Industrial, Food and Marine Bacteria (NCIMB) เมืองอเบอร์ดีน ประเทศสกอตแลนด์ ส่วนเชื้อแบคทีเรียแกรมลบ E. coli K12 ได้รับบริจาคโดยความอนุเคราะห์จากดร. จอน ฮ็อบแมน จากมหาวิทยาลัยนอตทิงแฮม นอตทิงแฮม สหราชอาณาจักร
2.5.2 การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย
แบคทีเรียถูกเก็บรวบรวมจากที่เก็บแบบแช่แข็ง (-80 oC) แล้วกระจายลงบน Tryptone Soy Agar (TSA) และฟักไว้ข้ามคืนที่อุณหภูมิ 37 oC จากนั้นใช้กลุ่มโคโลนีเพียงกลุ่มเดียวเพื่อฉีด Tryptone Soy Broth (TSB) ปริมาณ 100 มิลลิลิตรลงในขวด Erlenmeyer ขนาด 500 มิลลิลิตร จากนั้นนำไปวางไว้ในตู้ฟักแบบเขย่าที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ที่ความเร็ว 140 รอบต่อนาที เป็นเวลา 12 ชั่วโมง
จากนั้นใช้วัฒนธรรมนี้ 100µL เพื่อฉีด TSB สด 100 มล. ที่ฟักภายใต้เงื่อนไขเดียวกันกับที่อธิบายไว้ข้างต้น จนกระทั่งถึงเฟสกลางลอการิทึม ณ จุดนี้ วัฒนธรรมจะถูกเจือจางในฟอสเฟตบัฟเฟอร์แซไลน์ (PBS) อย่างเหมาะสม เพื่อผลิตสารแขวนลอยที่มีหน่วยสร้างโคโลนี (CFU) ต่อมิลลิลิตร ปฏิบัติตามขั้นตอนที่เหมือนกันสำหรับทั้ง B. subtilis และ E. coli
2.5.3 การกำหนดความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้ง (MIC) และความเข้มข้นต่ำสุดในการฆ่าเชื้อแบคทีเรีย (MBC)
เตรียมอนุภาคนาโนเจือจางในน้ำกลั่นปราศจากเชื้อเป็นชุด จากนั้นเติมสารละลายเจือจาง 4 มิลลิลิตรลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ TSB 20 มิลลิลิตร พร้อมแบคทีเรีย 20 มิลลิลิตรที่มีความเข้มข้น 108 CFU/mL แล้วฟักในเครื่องฟักไข่แบบเขย่า (รุ่น CERTOMAT® BS-1, Sartorius, Göttingen, เยอรมนี) ที่อุณหภูมิ 37°C ค้างคืน (Cao et al., 2010)
MIC ถูกกำหนดโดยการสังเกตด้วยภาพและยืนยันโดยการวัดความขุ่นโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-vis (Jenway 6300, Bibby Scientific Ltd, Essex, UK) ที่ 600 นาโนเมตรก่อนและหลังการบ่มเพาะ ส่วนย่อย (100µL) ของตัวอย่างที่ไม่พบว่ามีการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ได้รับการเพาะโดยใช้ TSB เพื่อกำหนดความเข้มข้นขั้นต่ำในการฆ่าเชื้อแบคทีเรีย (MBC)
ตัวอย่างถูกฟักที่อุณหภูมิ 37 °C ข้ามคืน และสังเกตเห็นการก่อตัวของโคโลนี MIC ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ของแบคทีเรียที่ทดสอบ (Wei et al., 2009)
2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลจากการทดลองซ้ำสามครั้งจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ยและค่าผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย การวิเคราะห์ทางสถิติของผลลัพธ์ดำเนินการโดยใช้ One-way ANOVA ร่วมกับการทดสอบ Post Hoc แบบเปรียบเทียบหลายครั้งของ Bonferroni การวิเคราะห์ทางสถิติทั้งหมดดำเนินการโดยใช้ IBM SPSS Statistics 21.0 (SPSS UK Ltd., Surrey, United Kingdom)
3. ผลการศึกษาและการอภิปราย
3.1 ลักษณะทางกายภาพ
รูปถ่ายของสารแขวนลอยของอนุภาคนาโนที่เตรียมโดยใช้กรรมวิธีที่อธิบายข้างต้นจะแสดงอยู่ในรูปที่ 1 การก่อตัวของสารแขวนลอยแบบคอลลอยด์ของอนุภาคนาโนสามารถมองเห็นได้ชัดเจนโดยการตรวจสอบด้วยสายตาของส่วนผสมรีเอเจนต์หลังจากความร้อนด้วยไมโครเวฟ
อนุภาคนาโน Ag (รูปที่ 1a) มีสีเหลืองอ่อนซึ่งจะเข้มขึ้นเมื่อความเข้มข้นของไคโตซานเพิ่มขึ้น การก่อตัวของอนุภาคนาโนโลหะได้รับการยืนยันด้วยสเปกโตรสโคปี UV-vis รูปที่ 2a แสดงสเปกตรัมการดูดกลืนที่มีค่าสูงสุดที่ประมาณ 420 นาโนเมตร ซึ่งบ่งชี้ถึงการก่อตัวของอนุภาคนาโน Ag (Ahmad et al., 2003)
ก่อนหน้านี้มีรายงานว่าอนุภาคนาโนของเกษตรมีสีเหลืองเล็กน้อยในสารละลายในน้ำ (Perera et al., 2013) สเปกตรัมสีและการดูดกลืนที่ 420 นาโนเมตรเกิดจากการกระตุ้นการแกว่งของพลาสมอนพื้นผิวของอะตอม Ag (Twu, Chen และ Shih, 2008)
พบว่าการเพิ่มความเข้มข้นของไคโตซานส่งผลให้การดูดกลืนสูงสุดเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยพร้อมกับการเพิ่มขึ้นโดยรวมของการดูดกลืน ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับผลลัพธ์ที่ได้จาก Huang, Yuan และ Yang (2004) ซึ่งสังเคราะห์อนุภาคนาโน Ag ในไคโตซานโดยการรีดิวซ์ด้วยโซเดียมโบโรไฮไดรด์
อนุภาคนาโน Cu (รูปที่ 1b) ซึ่งมีสีเปลี่ยนจากสีชมพูอ่อนไปเป็นสีแดงเข้มเมื่อความเข้มข้นของไคโตซานเพิ่มขึ้น สเปกตรัม UV (รูปที่ 2b) แสดงค่าสูงสุดที่ 550 นาโนเมตร ซึ่งยืนยันการมีอยู่ของอนุภาคนาโน Cu มีรายงานว่าอยู่ในช่วง 500 ถึง 600 นาโนเมตร (Mallick, Witcomb และ Scurrell, 2006)
ในทำนองเดียวกัน มีรายงานว่าสีของอนุภาคนาโน Cu ที่เพิ่งสังเคราะห์ใหม่และคงตัวโดยใช้การแขวนลอยของเมทริกซ์อะมิโนเคลย์ที่ละลายน้ำได้นั้นมีสีแดง ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของอนุภาคนาโน Cu (Datta, Kulkarni และ Eswaramoorthy, 2010)
รูปที่ 1c แสดงให้เห็นว่าส่วนผสมของอนุภาคนาโนของ Ag และ Cu มีสีส้ม (ตามที่คาดไว้จากส่วนผสม) แต่อนุภาคนาโนโลหะผสมของ Ag และ Cu มีสีน้ำตาลเข้ม Taner และคณะ (2011) ได้สร้างอนุภาคนาโน Ag/Cu แบบไบเมทัลลิกโดยการลดเกลือโลหะในสารละลายในน้ำด้วยไฮดราซีนไฮเดรต และยังได้รายงานด้วยว่าสีของสารแขวนลอยเป็นสีน้ำตาลเข้ม สเปกตรัม UV-vis ของอนุภาคนาโน Ag + Cu และ Ag/Cu แสดงอยู่ในรูปที่ 2c
สเปกตรัม Ag + Cu แสดงจุดสูงสุดที่แตกต่างกันสองจุดที่ 420 และ 550 นาโนเมตร ซึ่งบ่งบอกถึงส่วนผสมทางกายภาพของอนุภาคนาโน Ag และ Cu ในทางกลับกัน อนุภาคนาโน Ag/Cu แสดงให้เห็นค่าการดูดกลืนเพียงค่าเดียวที่อัตราส่วนกลาง ซึ่งยืนยันว่ามีการก่อตัวของโลหะผสมไบเมทัลลิก (Valodkar et al., 2011)
ในการศึกษานี้ ไคโตซานถูกละลายในสารละลายกรดอะซิติกเจือจาง ไคโตซานทำปฏิกิริยากับ H+ จากสารละลายกรดเพื่อผลิตไคโตซานที่ถูกโปรตอนด้วยกลุ่มฟังก์ชัน –NH3+ การนำกลุ่มฟังก์ชันเหล่านี้เข้าสู่โครงสร้างหลักของไคโตซานจะช่วยเพิ่มความสามารถในการละลายในน้ำได้ เมื่อเติมเงินและคอปเปอร์ไนเตรตลงในสารละลายไคโตซาน ไอออน Ag+ และ Cu2+ จะจับกับโมเลกุลขนาดใหญ่ของไคโตซานด้วยปฏิกิริยาไฟฟ้าสถิต เนื่องจากอะตอมออกซิเจนที่มีอิเล็กตรอนมากของกลุ่มไฮดรอกซิลและอีเธอร์ที่มีขั้วของไคโตซานสามารถทำปฏิกิริยากับไอออนโลหะที่มีประจุได้
จำเป็นต้องมีสารรีดิวซ์เพื่อให้ได้อิเล็กตรอนอิสระที่จำเป็นสำหรับการลดไอออนและการก่อตัวของอนุภาคนาโน (Tolaymat et al., 2010) ในการศึกษาครั้งนี้ได้ใช้กรดแอสคอร์บิกเป็นตัวรีดิวซ์ ดังนั้น อนุภาคนาโน Ag และ Cu จึงถูกสร้างขึ้นโดยการลดไอออน Ag+ และ Cu2+ ตามลำดับด้วยกรดแอสคอร์บิกส่วนเกิน (เพื่อการแปลง 100%)
อนุภาคนาโน Ag และ Cu ได้รับการทำให้คงตัวด้วยไคโตซานที่ถูกโปรตอนเพื่อป้องกันการรวมตัวและควบคุมขนาดของอนุภาคนาโนสุดท้ายที่ผลิต กลไกเดียวกันนี้ยังใช้ได้กับการสังเคราะห์อนุภาคนาโน Ag/Cu อีกด้วย
3.2 ขนาดอนุภาคเฉลี่ย
การเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสง UV-vis ที่กล่าวไว้ข้างต้นแสดงให้เห็นว่าขนาดของอนุภาคนาโนที่เกิดขึ้นจะแตกต่างกันไปตามความเข้มข้นของไคโตซาน ซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมนิวเคลียสและตัวทำให้คงตัว (Huang et al., 2004)
รูปที่ 3 แสดงขนาดอนุภาคเฉลี่ยของอนุภาคนาโน Ag และ Cu ที่สังเคราะห์โดยใช้สารละลายเกลือ 10 มิลลิโมลาร์ที่ความเข้มข้นของไคโตซานต่างกัน จากการสังเกตพบว่าขนาดอนุภาคโดยเฉลี่ยของอนุภาคนาโนทั้ง Ag และ Cu ลดลงเมื่อความเข้มข้นของไคโตซานเพิ่มขึ้น และที่ความเข้มข้นของไคโตซานเท่ากัน อนุภาคนาโน Ag จะมีขนาดใหญ่กว่าอนุภาคนาโน Cu เล็กน้อยตามที่แสดงในรูปที่ 3 การลดลงนี้เกิดจากผลการปกป้องของไคโตซาน โดยไคโตซานสามารถป้องกันการเติบโตของอนุภาคนาโนได้โดยการดูดซับไว้บนพื้นผิวของอนุภาค (Esumi, Takei และ Yoshimura, 2003)
ผลของความเข้มข้นของเงินและคอปเปอร์ไนเตรตต่อขนาดอนุภาคเฉลี่ยของอนุภาคนาโนแสดงอยู่ในรูปที่ 4 เมื่อความเข้มข้นของเงินและคอปเปอร์ไนเตรตเพิ่มขึ้นจาก 10 เป็น 50 มิลลิโมลาร์ ขนาดของอนุภาคนาโนก็เพิ่มขึ้นเกือบเท่ากัน ที่ความเข้มข้นของไคโตซานเท่ากัน โดยที่ความเข้มข้นของเกลือโลหะเพิ่มขึ้น ไคโตซานที่ถูกโปรตอนถูกดูดซับเข้าไปในอนุภาคนาโนที่เกิดขึ้นก่อนหน้านี้ได้น้อยลง และด้วยเหตุนี้ จึงเกิดอนุภาคนาโนที่มีขนาดใหญ่ขึ้น (Leung, Wong และ Xie, 2010)
การวิเคราะห์ทางสถิติแสดงให้เห็นว่าขนาดอนุภาคโดยเฉลี่ยของอนุภาคนาโนมีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญและได้รับผลกระทบจากความเข้มข้นของไคโตซานและเกลือโลหะ ดังนั้นขนาดของอนุภาคนาโนสามารถควบคุมได้โดยการปรับความเข้มข้นของไอออนโลหะหรือความเข้มข้นของไคโตซานในระหว่างการสังเคราะห์
3.3 เฟสซีตา
ศักยภาพซีตาเป็นพารามิเตอร์ที่สำคัญในการกำหนดเสถียรภาพของการแขวนลอยของอนุภาคนาโน สำหรับการแขวนลอยของอนุภาคนาโนที่มีเสถียรภาพทางกายภาพซึ่งได้รับการทำให้เสถียรโดยการผลักกันทางไฟฟ้าสถิตเพียงอย่างเดียว จำเป็นต้องมีศักย์ซีตาอย่างน้อย ± 30 mV (Singare et al., 2010) การผลักกันระหว่างอนุภาคนาโนขึ้นอยู่กับการมีศักย์ซีตาเชิงลบหรือเชิงบวกที่มีขนาดใหญ่
การวัดศักย์ซีตาของอนุภาคนาโนแสดงไว้ในรูปที่ 5 ซึ่งแสดงให้เห็นว่าอนุภาคนาโน Ag มีประจุพื้นผิวบวกที่เพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของไคโตซานตั้งแต่ +23.8 mV ที่ 1% (w/v) ถึง +32.1 mV ที่สารละลายไคโตซาน 3% w/v
อนุภาคนาโน Cu มีประจุบวกพื้นผิวสูงกว่าเล็กน้อย โดยอยู่ในช่วง +26.4 mV ที่ 1% (w/v) ถึง +33.9 mV ที่ 3% (w/v) ถึงแม้ว่าในทางสถิติจะไม่พบความแตกต่างที่สำคัญในศักย์ซีตาของอนุภาคนาโน Ag และ Cu ก็ตาม
ศักยภาพซีตาของอนุภาคนาโนเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของไคโตซานที่เพิ่มขึ้น เนื่องมาจากมีโปรตอน – NH3 + ที่มีอยู่มากขึ้นบนพื้นผิวของอนุภาคนาโนที่เกิดขึ้น วิธีนี้จะทำให้เกิดแรงผลักกันทางไฟฟ้าสถิตระหว่างอนุภาคมากขึ้น ส่งผลให้มีอัตราการเกาะตัวที่ต่ำลง และส่งผลให้การกระจายตัวของอนุภาคระดับนาโนมีเสถียรภาพมากขึ้น
รูปที่ 5b แสดงศักย์ซีตาของอนุภาคนาโน Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ที่เตรียมจากสารละลายเกลือโลหะ 50 มิลลิโมลาร์และสารละลายไคโตซาน 3% (w/v) ตามลำดับ ในกรณีนี้ อนุภาคนาโน Ag มีประจุพื้นผิวสูงกว่าเล็กน้อย (+37.8 mV) เมื่อเทียบกับอนุภาคนาโน Cu (+35.5 mV)
อนุภาคนาโนผสม (Ag + Cu) ให้ค่า +39.1 mV และอนุภาคนาโน Ag/Cu มีค่า +35.2 mV ความแตกต่างเหล่านี้ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติ เนื่องจากอาจมีผลของขนาดอนุภาคต่อศักยภาพซีตาของอนุภาคนาโนทั้งสี่ประเภท (Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu) จึงได้เปรียบเทียบศักยภาพซีตาสำหรับตัวอย่างที่เลือกซึ่งสอดคล้องกับขนาดอนุภาคเฉลี่ย 200 นาโนเมตรมากที่สุด
สารเหล่านี้ได้รับการสังเคราะห์ในไคโตซาน 3% (w/v) และสอดคล้องกับความเข้มข้นของไอออนโลหะที่ 12.1, 32.0 และ 18.2 mM สำหรับ Ag, Cu และ Ag/Cu ตามลำดับ Ag + Cu ผลิตโดยการผสม Ag ที่เตรียมที่ 12.1 mM กับ Cu ที่เตรียมที่ 32.0 mM ศักย์ซีตาที่สอดคล้องกันคือ +33.8, 33.1, 32.6 และ 33.3 mV สำหรับ Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ตามลำดับ (รูปที่ 5c)
มีลักษณะคล้ายคลึงกันมากกับตัวอย่างที่แสดงในรูปที่ 5b ซึ่งตัวอย่างทั้งหมดถูกเตรียมโดยใช้สารละลาย 50 มิลลิโมลาร์ (สอดคล้องกับขนาดอนุภาคเฉลี่ย 793, 292, 542 และ 633 นาโนเมตร ตามลำดับ) การค้นพบครั้งนี้ชี้ให้เห็นว่าความเข้มข้นของเกลือโลหะที่ใช้ในระหว่างการเตรียมไม่มีผลต่อประจุของอนุภาคนาโนอย่างมีนัยสำคัญ
ผลลัพธ์ที่ได้ที่นี่สอดคล้องกับผลลัพธ์ของ Xiong et al. (2013) ซึ่งมีรายงานว่าศักย์ซีตาของอนุภาคนาโน Cu อยู่ที่ +32 mV ซึ่งบ่งชี้ว่าค่านี้สูงเพียงพอที่จะรักษาการกระจายตัวของคอลลอยด์ที่เสถียรได้
3.4 คุณสมบัติต้านเชื้อแบคทีเรีย
ดำเนินการทดสอบ MIC และ MBC เพื่อประเมินฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียของอนุภาคนาโนต่อ B. subtilis และ E. coli MIC ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ไม่มีการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ ในขณะที่ MBC ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ไม่สังเกตเห็นโคโลนี (Wei et al., 2009)
ค่า MIC และ MBC เมื่อเทียบกับ B. subtilis และ E. coli ของอนุภาคนาโน Ag, Cu, Ag/Cu และ Ag + Cu ที่เตรียมจากสารละลายเกลือโลหะ 50 mM แสดงอยู่ในตารางที่ 1 โดยค่า MIC หรือ MBC ที่ต่ำกว่าสอดคล้องกับประสิทธิภาพในการต่อต้านเชื้อแบคทีเรียที่สูงขึ้น เพื่อเป็นการควบคุม เพื่อประเมินฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียที่เป็นไปได้ของกรดแอสคอร์บิก ได้มีการทดลองแยกกัน โดยเตรียมตัวอย่างตามวิธีในหัวข้อ 2.3.1 แต่ไม่มีไคโตซาน และเงินหรือคอปเปอร์ไนเตรต และทดสอบกับทั้ง E. coli และ B. subtilis
ตัวอย่างเหล่านี้ไม่แสดงฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียเมื่อไม่มีการเจือจาง แต่มีฤทธิ์ยับยั้งที่ความเข้มข้นสูงสุดและการเจือจาง 1/2 อย่างไรก็ตาม ภายใต้เงื่อนไขดังกล่าว ระดับวิตามินซีจะสูงกว่าระดับที่พบในสารแขวนลอยของอนุภาคนาโนซึ่งมีรายละเอียดในตารางที่ 1 ถึงพันเท่า ดังนั้น จึงสามารถละเลยผลต่อต้านแบคทีเรียโดยตรงอันเนื่องมาจากการมีอยู่ของวิตามินซีในทดลองของเราจึงได้
ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าอนุภาคนาโน Ag มีค่า MIC และ MBC สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับอนุภาคนาโน Cu ในความเข้มข้นเท่ากันของไคโตซาน (3% w/v) และเกลือโลหะ (50 mM) ผลลัพธ์ที่นำเสนอที่นี่แสดงให้เห็นว่าที่ความเข้มข้นของเกลือโลหะเท่ากัน นาโนอนุภาค Cu จะมีขนาดอนุภาคที่เล็กกว่าอนุภาคนาโน Ag ตามลักษณะเฉพาะ
ขนาดอนุภาคที่เล็กลงมีแนวโน้มที่จะเพิ่มคุณสมบัติในการต่อต้านแบคทีเรีย เนื่องจากเมื่อขนาดลดลง จะมีอะตอมบนพื้นผิวจำนวนมากขึ้นที่สามารถโต้ตอบกับแบคทีเรียได้ (Marambio-Jones & Hoek, 2010) ส่วนผสมของอนุภาคนาโน Ag และ Cu ที่ความเข้มข้น 50 มิลลิโมลาร์แสดงพฤติกรรมระดับกลาง แม้ว่าทางสถิติจะคล้ายคลึงกับอนุภาคนาโน Ag สำหรับแบคทีเรียทั้งสองตัวก็ตาม อนุภาคนาโนไบเมทัลลิกทองแดงและเงิน 50 มิลลิโมลาร์แสดงให้เห็นประสิทธิภาพในการต่อต้านแบคทีเรียสูงสุด
อนุภาคนาโนทั้งหมดแสดงค่า MIC และ MBC ที่คล้ายคลึงกันมาก ซึ่งบ่งชี้ว่าอนุภาคนาโนมีผลในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียมากกว่าการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทั้งสองชนิดนี้ Valodkar et al. ในปี 2011 รายงานค่า MIC และ MBC ที่ 0.26 และ 0.78 มก./ล. สำหรับอนุภาคนาโน Ag 10 มิลลิโมลาร์ และค่า MIC และ MBC ที่ 0.23 และ 0.65 มก./ล. สำหรับอนุภาคนาโนเงินไบเมทัลลิก Ag/Cu 10 มิลลิโมลาร์ เมื่อเทียบกับความเข้มข้นของแบคทีเรีย E. coli ที่ต่ำกว่า (104 CFU/mL) เมื่อเทียบกับที่ใช้ที่นี่ (108 CFU/mL)
Taner et al. ในปี 2011 รายงานค่า MIC เพียง > 150 มก./ล. สำหรับอนุภาคนาโน Ag และค่าที่เหมือนกันสำหรับ MIC และ MBC ของอนุภาคนาโนทองแดงและเงินที่ 0.5 มก./ล. เมื่อเทียบกับความเข้มข้นสูง (108 CFU/mL) ของ E. coli ค่า MIC/MBC ที่รายงานที่นี่ต่ำกว่าค่าที่ได้จาก Valodkar et al., 2011 และ Taner et al., 2011 ซึ่งบ่งชี้ว่ามีฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียที่ดีกว่า และแสดงให้เห็นว่าไคโตซานซึ่งทำหน้าที่เป็นสารคงตัวยังมีส่วนช่วยในการต้านเชื้อแบคทีเรียอีกด้วย
ผลลัพธ์ที่ได้ที่นี่ไม่สามารถเปรียบเทียบโดยตรงกับผลลัพธ์ของ Said-Galiev et al. (2011) เพราะไม่ได้รายงานผลการค้นพบของตนต่อ MIC หรือ MBC Huang et al., (2004) สังเคราะห์อนุภาคนาโนโดยใช้ไคโตซานแต่ไม่ได้รายงานเกี่ยวกับฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียของอนุภาคนาโน ผลการวิจัยที่รายงานที่นี่แสดงให้เห็นว่าค่า MIC/MBC ของอนุภาคนาโนโลหะผสมไบเมทัลลิกมีค่าต่ำกว่าค่าของอนุภาคนาโนโลหะบริสุทธิ์อย่างมาก
เนื่องจากขนาดของอนุภาคจะมีอิทธิพลต่อฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย เนื่องจากพื้นที่ผิวเฉพาะที่แตกต่างกัน ตัวอย่างต่างๆ จึงถูกเปรียบเทียบกันในตารางที่ 2 โดยรักษาขนาดอนุภาคโดยเฉลี่ยให้เกือบคงที่ในทุกตัวอย่างที่ประมาณ 200 นาโนเมตร (เช่นเดียวกับที่ทำสำหรับศักย์ซีตาที่นำเสนอในรูปที่ 5c)
บนพื้นฐานนี้ อนุภาคนาโน Ag แสดงค่า MIC และ MBC ที่ต่ำกว่าอนุภาคนาโน Cu อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับแบคทีเรียทั้งสองชนิด ดังนั้นจึงสันนิษฐานได้ว่า Ag มีฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียมากกว่า Cu พบว่าค่า MIC และ MBC ต่ำที่สุดสำหรับอนุภาคนาโนทองแดงและเงินที่สัมผัสกับทั้ง B. subtilis และ E. coli ที่ความเข้มข้นของเกลือโลหะและไคโตซานหรือขนาดอนุภาคนาโนคงที่เท่ากัน
อนุภาคนาโน Cu แสดงให้เห็นผลในการต่อต้านแบคทีเรียที่เหมือนกันทางสถิติเมื่อเปรียบเทียบกับส่วนผสมของ Ag และอนุภาคนาโน Cu ทั้งใน B. subtilis และ E. coli แบคทีเรียมีประจุลบเนื่องจากมีคาร์บอกซิลิกส่วนเกินและกลุ่มอื่นที่ทำให้พื้นผิวเซลล์มีประจุลบ (Stoimenov, Klinger, Marchin, & Klabunde, 2002) สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนที่ผลิตขึ้นที่นี่จะมีประจุบวกตามที่เปิดเผยโดยการวัดศักย์ซีตา
แรงไฟฟ้าสถิตระหว่างอนุภาคนาโนที่มีประจุบวกและเซลล์แบคทีเรียที่มีประจุลบจะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของฤทธิ์ต่อต้านแบคทีเรีย การยึดเกาะของอนุภาคนาโนกับพื้นผิวของแบคทีเรียจะทำให้คุณสมบัติของเยื่อหุ้มเซลล์เปลี่ยนแปลงไป ส่งผลให้แบคทีเรียตายในที่สุด (Li et al., 2008) ค่า MIC และ MBC ของอนุภาคนาโนที่สังเคราะห์ขึ้นต่อทั้ง B. subtilis และ E. coli แสดงให้เห็นว่าแบคทีเรียแกรมบวกมีความไวต่ออนุภาคนาโนมากกว่าแบคทีเรียแกรมลบ สาเหตุที่เป็นไปได้มากที่สุดคือความแตกต่างในโครงสร้างผนังเซลล์แบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบ โดยผนังเซลล์แบคทีเรียแกรมลบมีโครงสร้างที่ซับซ้อนกว่าผนังเซลล์แบคทีเรียแกรมบวก
4. บทสรุป
อนุภาคนาโน Ag และ Cu ได้รับการสังเคราะห์โดยใช้กรดแอสคอร์บิกเป็นตัวรีดิวซ์ในสารละลายไคโตซานโดยใช้วิธีการให้ความร้อนด้วยไมโครเวฟที่มีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ กระบวนการสังเคราะห์ยังรวดเร็ว ราคาไม่แพง เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม ประหยัดพลังงาน และไม่ก่อให้เกิดของเสียที่เป็นพิษ แสดงให้เห็นว่าขนาดของอนุภาคนาโนสามารถควบคุมได้โดยการปรับความเข้มข้นของไคโตซานและเงินและคอปเปอร์ไนเตรตที่ใช้ในการสังเคราะห์
ขนาดของอนุภาคสามารถเพิ่มขึ้นได้โดยการลดความเข้มข้นของไคโตซานหรือเพิ่มความเข้มข้นของไอออนโลหะ อนุภาคนาโนที่ผลิตได้มีประจุพื้นผิวเป็นบวก และไคโตซานที่ใช้ในการสังเคราะห์ช่วยให้การแขวนลอยของอนุภาคเหล่านี้มีความเสถียรและป้องกันการรวมตัวกัน
การทดสอบ MIC และ MBC แสดงให้เห็นผลการฆ่าเชื้อแบคทีเรียที่รุนแรง โดยอนุภาคนาโน Ag แสดงให้เห็นประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับอนุภาคนาโน Cu ที่ขนาดอนุภาคเฉลี่ยเท่ากัน อนุภาคนาโนทั้งหมดแสดงค่า MIC และ MBC ที่คล้ายคลึงกันมาก ซึ่งบ่งชี้ว่าอนุภาคนาโนมีผลในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียมากกว่าการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทั้งสองชนิดนี้ ผลการต่อต้านแบคทีเรียที่ดีที่สุดพบเมื่อรวม Ag และ Cu เข้าด้วยกันในระหว่างการสังเคราะห์เพื่อสร้างอนุภาคโลหะผสม ขณะนี้อยู่ระหว่างการศึกษาวิจัยการใช้งานครั้งที่สองในทางการแพทย์
รายการรูปภาพ
รูปที่ 1 สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนของ (a) Ag และ (b) Cu ที่สังเคราะห์ในเกลือโลหะ 10 mM และไคโตซานที่มีความเข้มข้นต่างกันที่ 1, 2 และ 3% (w/v) ตามลำดับ (จากซ้ายไปขวา) (c) จากซ้ายไปขวา: สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนของ Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ที่สังเคราะห์ในเกลือโลหะ 50 mM และไคโตซาน 3% (w/v)
รูปที่ 2 สเปกตรัมการดูดกลืนของอนุภาคนาโนของ (a) Ag และ (b) Cu ที่สังเคราะห์ในเกลือโลหะ 10 mM และไคโตซานที่ความเข้มข้นต่างกันที่ 1, 2 และ 3% (w/v) ตามลำดับ (c) Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ในเกลือโลหะ 50 mM และไคโตซาน 3% (w/v) ตามลำดับ
รูปที่ 3 ขนาดอนุภาคเฉลี่ยของอนุภาคนาโน (a) Ag (b) Cu ที่สังเคราะห์ในเกลือโลหะ 10 mM และความเข้มข้นของไคโตซานต่างกัน แถบข้อผิดพลาดแสดงถึงค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานจากค่าเฉลี่ยในการทดลองซ้ำสามครั้ง ตัวอักษรที่แตกต่างกันแสดงถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ p ≤ 0.05
รูปที่ 4 ขนาดอนุภาคเฉลี่ยของอนุภาคนาโนที่เตรียมด้วย (ก) ซิลเวอร์ไนเตรต (ข) คอปเปอร์ไนเตรต (ค) เงินและคอปเปอร์ไนเตรต (ความเข้มข้นรวมกัน) ในไคโตซาน 3% (w/v) แถบข้อผิดพลาดแสดงถึงค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานจากค่าเฉลี่ยของการทดลองซ้ำสามครั้ง ตัวอักษรที่แตกต่างกันแสดงถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ p ≤ 0.05
รูปที่ 5 ศักย์ซีตาของอนุภาคนาโนของ (ก) Ag และ Cu ของเกลือโลหะ 10 มิลลิโมลาร์ และไคโตซานที่มีความเข้มข้นต่างกัน (ข) Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ของเกลือโลหะ 50 มิลลิโมลาร์ และไคโตซาน 3% (w/v) (ค) Ag, Cu, Ag + Cu และ Ag/Cu ที่ความเข้มข้นของไนเตรตปรับให้มีขนาดอนุภาคเฉลี่ย 200 นาโนเมตร (โดยมีไคโตซาน 3% w/v) แถบข้อผิดพลาดแสดงถึงค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานจากค่าเฉลี่ยของการทดลองซ้ำสามครั้ง ตัวอักษรที่แตกต่างกันแสดงถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ p ≤ 0.05
รายการตาราง
ตารางที่ 1: ค่า MIC และ MBC ของอนุภาคนาโน Ag, Cu, Ag/Cu และ Ag + Cu ที่สังเคราะห์ในเกลือโลหะ 50 mM และไคโตซาน 3% (w/v) เทียบกับ B. subtilis และ E. coli ตัวอักษรที่ขีดเส้นใต้เหมือนกันแสดงว่าไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติ (p>0.05) ระหว่าง MIC และ MBC ในการเปรียบเทียบตามคอลัมน์ และตัวอักษรที่ขีดเส้นเหนือเหมือนกันแสดงว่าไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติ (p>0.05) ในการเปรียบเทียบตามแถว ตามที่ระบุโดย ANOVA ทางเดียวกับการทดสอบเปรียบเทียบหลายรายการของ Bonferroni
ตารางที่ 2: ค่า MIC และ MBC ของอนุภาคนาโน Ag, Cu, Ag/Cu และ Ag + Cu ที่มีขนาดอนุภาคเฉลี่ย 200 นาโนเมตร เมื่อเทียบกับ B. subtilis และ E. coli ตัวอักษรที่ขีดเส้นใต้เหมือนกันแสดงว่าไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติ (p>0.05) ระหว่าง MIC และ MBC ในการเปรียบเทียบตามคอลัมน์ และตัวอักษรที่ขีดเส้นเหนือเหมือนกันแสดงว่าไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติ (p>0.05) ในการเปรียบเทียบตามแถว ตามที่ระบุโดย ANOVA ทางเดียวกับการทดสอบเปรียบเทียบหลายรายการของ Bonferroni
อ้างอิง:
N. MatZainabA.G.F.StapleyaG.Shamaa