Nano bạc có đặc tính kháng nấm trên da Dermatophytes
Các hạt nano bạc hình cầu (nano-Ag) đã được tổng hợp và tác dụng chống nấm của chúng đối với các tác nhân gây bệnh trên da đã được nghiên cứu. Nano bạc cho thấy hoạt động mạnh mẽ chống lại các chủng phân lập lâm sàng và các chủng ATCC của Trichophyton mentagrophytes và các loài Candida (IC80, 1-7 µg / ml). Hoạt tính của nano-Ag có thể so sánh với hoạt động của amphotericin B, nhưng vượt trội hơn so với hoạt động của fluconazole (amphotericin B IC80, 1-5 µg / ml; fluconazole IC80, 10-30 µg / ml). Ngoài ra, chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của chúng đối với sự lưỡng hình của nấm Candida albicans. Kết quả cho thấy nano-Ag có tác dụng lên sợi nấm. Do đó, nghiên cứu hiện tại chỉ ra rằng nano bạc có thể có hoạt tính kháng nấm đáng kể, xứng đáng được nghiên cứu thêm cho các ứng dụng lâm sàng.
(Bản quyền thuộc về NanoCMM Technology)
Quý khách hàng có nhu cầu nano bạc nguyên liệu 15000 ppm dùng trong thực phẩm vui lòng liên hệ Hotline 0378.622.740 – 098.435.9664
GIỚI THIỆU
Nhiễm trùng da do nấm, chẳng hạn như các loài Trichophyton và Candida, trở nên phổ biến hơn trong những năm gần đây [19]. Đặc biệt, nhiễm nấm thường xảy ra hơn ở những bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch do hóa trị liệu ung thư, hoặc nhiễm vi rút suy giảm miễn dịch cơ quan hoặc người [11]. Xu hướng tăng này là đáng lo ngại, xem xét số lượng hạn chế các loại thuốc chống nấm có sẵn vì dự phòng bằng thuốc chống nấm có thể dẫn đến sự xuất hiện của các chủng kháng thuốc. Do đó, nhu cầu y tế cấp thiết và không thể tránh khỏi đối với các loại thuốc kháng nấm mới. Từ thời cổ đại, người ta đã biết rằng bạc và các hợp chất của nó là những chất kháng khuẩn hiệu quả [6, 14, 15]. Đặc biệt, do những tiến bộ gần đây trong nghiên cứu về hạt nano kim loại, nano-Ag đã được chú ý đặc biệt như một chất kháng khuẩn có thể có [1, 7, 9, 16]. Vì vậy, việc điều chế các hạt bạc có kích thước nano đồng đều với các yêu cầu cụ thể về kích thước, hình dạng và các tính chất lý hóa rất được quan tâm trong công thức sản xuất dược phẩm mới [3, 10]. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra tác dụng kháng khuẩn của chúng, nhưng tác dụng của nano bạc đối với nấm gây bệnh trên da hầu như chưa được biết đến. Trong nghiên cứu này, nano-Ag đã được tổng hợp và tác dụng chống nấm của nó trên các chủng phân lập lâm sàng và các chủng ATCC của Trichophyton mentagrophytes và các loài Candida đã được nghiên cứu.
Điều chế Nano-Ag
Một trăm g bạc rắn được hòa tan trong 100 ml axit nitric 100% ở 90oC, và sau đó thêm 1 l nước cất. Bằng cách thêm natri clorua vào dung dịch bạc, các ion Ag giảm và tụ lại với nhau để tạo thành các hạt nano đơn phân tán trong môi trường nước. Bởi vì nồng độ cuối cùng của bạc keo là 60.000 ppm, dung dịch này được pha loãng, và sau đó các mẫu có nồng độ khác nhau được sử dụng để khảo sát tác dụng chống nấm của nano-Ag. Kích thước và hình thái của nano-Ag được kiểm tra bằng cách sử dụng kính hiển vi điện tử truyền qua (H- 7600; Hitachi, Ltd.). Kết quả cho thấy nano-Ag có dạng hình cầu và kích thước trung bình của nó là 3 nm (Hình 1).
Hình 1: Ảnh TEM của nano bạc
Xác định tính nhạy cảm với nấm
Tổng cộng có 44 chủng của 6 loài nấm được sử dụng trong nghiên cứu này. Candida albicans (ATCC 90028), Candida glabrata (ATCC 90030), Candida parapsilosis (ATCC 22019) và Candida krusei (ATCC 6258) được lấy từ Bộ sưu tập Văn hóa Loại Mỹ (ATCC) (Manassas, VA, U.S.A.). Các phân lập lâm sàng của Candida spp. được lấy từ Khoa Y học Phòng thí nghiệm, Trường Y Đại học Quốc gia Chonnam (Gwangju, Hàn Quốc), và các phân lập lâm sàng của Trichophyton mentagrophytes được lấy từ Viện Mycology Y tế, Phòng khám Da liễu Công giáo (Daegu, Hàn Quốc). Nấm Candida spp. và Trichophyton mentagrophytes được nuôi cấy trong thạch Sabraud dextrose (SDA) và thạch dextrose khoai tây (PDA) ở 35oC, tương ứng. Bộ MIC cho Candida spp. và T. mentagrophytes được xác định bằng phương pháp pha loãng nước dùng dựa trên phương pháp của Ủy ban Quốc gia về Tiêu chuẩn Phòng thí nghiệm Lâm sàng (NCCLS; nay được đổi tên thành Viện Tiêu chuẩn Phòng thí nghiệm và Lâm sàng, CLSI, 2000) được nêu trong các tài liệu M-27A [12] và M-38P [13], tương ứng. Môi trường RPMI 1640 được đệm đến pH 7,0 với axit propanesulfonic 3 (N-morpholino) (MOPS) được sử dụng làm môi trường nuôi cấy và kích thước vi khuẩn Candida spp. là 0,5 × 103 đến 2,5 × 103 tế bào / ml và của T. mentagrophytes là 0,4 × 104 đến 5 × 104 tế bào / ml. Các đĩa pha loãng vi sinh được cấy nấm được ủ ở 35oC, và độ đục của các giếng kiểm soát sinh trưởng được quan sát sau mỗi 24 giờ. Nồng độ ức chế 80% (IC80) được xác định là nồng độ thấp nhất ức chế 80% sự tăng trưởng được xác định bằng cách so sánh với sự tăng trưởng trong các giếng đối chứng. Sự tăng trưởng được kiểm tra bằng thiết bị đọc vi tấm (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, U.S.A.) bằng cách theo dõi sự hấp thụ ở bước sóng 405 nm. Trong nghiên cứu hiện tại, amphotericin B và fluconazole được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực đối với nấm; amphotericin B là thuốc diệt nấm được sử dụng rộng rãi trong điều trị nhiễm trùng toàn thân nghiêm trọng [4], và fluconazole được sử dụng trong điều trị nhiễm trùng da nông do nấm da và các loài Candida [2]. nano bạc, trong khoảng IC80 từ 1-7 µg / ml, cho thấy hoạt tính kháng nấm đáng kể đối với T. mentagrophytes và các loài Candida. Đối với tất cả các chủng nấm, nano bạc thể hiện hoạt tính tương tự với amphotericin B, cho thấy giá trị IC80 là 1-5 µg / ml. Nano bạc cho thấy bản thân có hoạt tính mạnh hơn fluconazole, cho thấy giá trị IC80 là 10-30 µg / ml. Tuy nhiên, hợp chất này thể hiện hoạt tính kém hơn amphotericin B, cho thấy giá trị IC80 là 2-4 µg / ml đối với C. parapsilosis và C. krusei (Bảng 1)
Ảnh hưởng của nano bạc đến quá trình chuyển đổi Dimorphic
Tế bào C. albicans được duy trì bằng cách nuôi cấy con định kỳ trong môi trường chiết xuất nấm men lỏng / peptone / dextrose (YPD). Việc nuôi cấy tế bào nấm men (blastoconidia) được duy trì trong môi trường YPD lỏng ở 37oC. Để tạo ra sự hình thành sợi nấm, các mẫu cấy được bổ sung trực tiếp 20% huyết thanh bò thai (FBS). Sự chuyển đổi lưỡng hình ở C. albicans được khảo sát từ các mẫu cấy chứa 2 mg / ml nano-Ag (ở IC80), được ủ trong 48 giờ ở 37oC [5, 17, 18]. Sự chuyển đổi lưỡng hình sang dạng sợi nấm được phát hiện bằng kính hiển vi ánh sáng tương phản pha (Nikon, Eclipsete300, Tokyo, Nhật Bản). Sự chuyển đổi lưỡng hình của C. albicans từ dạng nấm men sang dạng sợi nấm là nguyên nhân gây bệnh, với hình dạng sợi nấm chủ yếu được tìm thấy trong quá trình xâm nhập vào mô vật chủ. Dạng sợi nấm có thể được tạo ra bởi nhiệt độ, độ pH và huyết thanh [8]. Như được thể hiện trong Hình 2, sợi nấm do huyết thanh gây ra đã bị ức chế đáng kể từ việc mở rộng và hình thành khi có nano bạc (Hình 2C), nhưng sợi nấm được hình thành vẫn bình thường khi không có nano-Ag (Hình 2B) . Những kết quả này cho thấy nano bạc là một hợp chất tiềm năng trong điều trị các bệnh truyền nhiễm do nấm. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra tác dụng kháng khuẩn của nano bạc [6, 14, 15], nhưng tác dụng của nano bạc đối với nấm bệnh trên da bao gồm cả các chủng T. mentagrophytes và Candida phân lập lâm sàng hầu như chưa được biết đến. Ý nghĩa chính của nghiên cứu này là quan sát thấy nano-Ag có thể ức chế sự phát triển của nấm da, gây nhiễm trùng nấm nông. Theo hiểu biết của chúng tôi, đây là nghiên cứu đầu tiên ứng dụng thành công nano bạc lên da liễu. Thứ hai, thực tế là phương pháp chuẩn bị nano-Ag được mô tả ở đây là hiệu quả về chi phí cũng rất quan trọng. Do đó, có thể mong đợi rằng nano-Ag có thể có tiềm năng như một chất chống nhiễm trùng đối với bệnh ở người do vi khuẩn da liễu gây ra.
Hình 2. Ảnh hưởng của nano bạc đến quá trình chuyển đổi lưỡng hình ở C. albicans. Kiểm soát nấm men mà không có 20% FBS và nano bạc (A), không có nano bạc (B) đã qua xử lý, hoặc với 2 µg / ml nano bạc (C).
Mô tả: IC80 nồng độ dung dịch thử nghiệm ức chế 80% lượng nấm.
Nguồn: Antifungal effect of silver nanoparticles on dermatophytes
Kim, Keuk-Jun1, Woo Sang Sung1, Seok-Ki Moon2, Jong-Soo Choi2, Jong Guk Kim1,
and Dong Gun Lee1*